影響紫外可見分光光度計光度準(zhǔn)確度的因素有哪些?
紫外可見分光光度計的校準(zhǔn)主要是通過對一些有數(shù)值型的技術(shù)指標(biāo)測試來進(jìn)行。如波長準(zhǔn)確度、波長重復(fù)性、光譜帶寬、雜散光、分辨率、透射比誤差、透射比重復(fù)性、噪聲、基線平直性等,這里主要介紹波長準(zhǔn)確度和波長重復(fù)佳、透射比準(zhǔn)確度和透射比重復(fù)性兩個項目校準(zhǔn)的具體儀器條件或校準(zhǔn)步驟。
①波長準(zhǔn)確度和波長重復(fù)性 若儀器能夠放置低壓汞燈的,按照檢定規(guī)程低壓汞燈進(jìn)行全波長測試,否則可用儀器固有的氘灼測試,取單束光能量方式,掃描速度15nm/min,響應(yīng)快,小帶寬0.1nm,量程0~100%,對486. 02nm和656. 10nm兩個單峰進(jìn)行單方向重復(fù)掃描3次,測量出譜圖上的2條譜線波長,波長測量的平均值與波長的標(biāo)準(zhǔn)值之差就是波長準(zhǔn)確度,測量波長的大值與小值之差就是波長重復(fù)性。
?、谕干浔葴?zhǔn)確度和透射比重復(fù)性 取帶寬2nm,用1套標(biāo)準(zhǔn)石英吸收池分別裝空白溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.006000%的重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液,在35nm,257nm,313nm,350nm四個波長處連續(xù)3次測量透射比,與檢定規(guī)程中附帶的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較,測量平均值與標(biāo)準(zhǔn)值之差就是透射比準(zhǔn)確度,測量值的大值與小值之差就是透射比重復(fù)性。
影響紫外可見分光光度計光度準(zhǔn)確度的主要因素有以下幾個方面:
?、賰x器的雜散光。
②儀器的光度噪聲。
?、蹆x器的基線平直度。
?、軆x器的光譜帶寬。不同的光譜帶寬分析誤差不同;不同試樣有不同的*分析測試光譜帶寬。
?、莶ㄩL準(zhǔn)確度。對同一物質(zhì),不同的波長有不同的摩爾吸光系數(shù),即不同的靈敏度。
?、拊嚇拥膩碓?,包括樣品的制備和取樣的方法(如稱量、容量、溶劑、試劑、pH值、時間、溫度等)。
?、弑壬蟮男阅?,包括比色皿的加工誤差、比色皿的配對、比色皿的玷污等。
由此可知,光度準(zhǔn)確度是一個綜合性的性能技術(shù)指標(biāo)。要使用紫外可見分光光度計測得準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù),必須注意上述幾個方面的影響。特別是在分析測試時,如何選擇(或設(shè)定)這些技術(shù)指標(biāo)是非常重要的。應(yīng)該指出的是,紫外可見分光光度計在同時給出吸光度誤差和透射比誤差時,兩者不能相互矛盾。